Inaktywacja hormonu tarczycy w nowotworach zrębu żołądkowo-jelitowego AD 2

Sunitynib był kontynuowany aż do śmierci pacjenta z progresji guza 23 miesiące później. Metody
Testy odwodnienia
Zastosowaliśmy wysokosprawną chromatografię cieczową do oznaczenia aktywności D3, jak opisano wcześniej, 5 w reakcjach 150 mm3 zawierających 0 do 150 .g białka komórkowego, 10 mM ditiotreitolu i 0,5 do 500 nM trijodotyroniny znakowanej jodem 125 (PerkinElmer ). Testy dla dejodynazy typu (D1) były w reakcjach 150 mm3 zawierających 3 .g białka i 100 nM odwróconej trójjodotyroniny znakowanej jodem-125. Testy dla dejodynazy typu 2 (D2) były w reakcjach 75 mm3 zawierających 10 .g białka, 0,2 względem 100 nM tyroksyny znakowanej jodem 125 i 100 nM trójjodotyroniny. Badania zostały zatwierdzone przez instytucjonalną komisję odwoławczą w każdym ośrodku badawczym.
Inne analizy komórkowe
Przeprowadzono analizy immunohistochemiczne przy użyciu 1: 1000 poliklonalnego króliczego przeciwciała anty-D3 (Novus Biologicals), jak opisano poprzednio.6 Komórki namnażano w pożywce modyfikowanej Iscove a Dulbecco z 15% surowicą płodową (komórki GIST-T1), 7 w pożywce RPMI z 10% surowicą płodową-cielęcą (komórki nerwiaka niedojrzałego SK-N-AS) lub w podłożu Eagle a z modyfikowaną Dulbecco z 10% surowicą płodową cielęcą (komórki raka piersi MCF-7) (Clontech). Do zaopatrzenia fizjologicznych stężeń tyroksyny i trijodotyroniny użyto niezalezionej surowicy płodowej. 9 Dla wszystkich linii komórkowych pożywka zawierała 100 nM selenianu sodu. Wszystkie odczynniki zakupiono od Sigma-Aldrich, z wyjątkiem imatinibu (laboratoria LC) i kwasu iopanowego (MP Biochemicals).
Komórki GIST-T1 wysiano na 5000 komórek na studzienkę i po 72-godzinnej ekspozycji na leki, żywotność analizowano za pomocą CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega). Proliferację mierzono za pomocą licznika Coulter.
Przeprowadzono immunoblotting białka komórkowego (20 .g na próbkę) z użyciem króliczego przeciwciała poliklonalnego przeciwko polimerazie poli (adenozyno-difosforanowej [ADP] -boboza) (Roche).
Ekspresja genu
Wyekstrahowaliśmy całkowity RNA za pomocą TRIzol (Ambion), a następnie wykonano odwrotną transkrypcję z użyciem zestawu do syntezy DNA (i Bio-Rad). Wszystkie próbki oznaczono ilościowo za pomocą systemu detekcji PCR w czasie rzeczywistym Multicolor Real-Time (Bio-Rad).
Analiza statystyczna
Zastosowaliśmy analizę wariancji w celu przeprowadzenia wszystkich porównań w eksperymentach z hodowlami komórkowymi. Wartości P mniejsze niż 0,05 uważano za wskazujące na istotność statystyczną. Zastosowaliśmy zasadę zamkniętych testów, aby utrzymać wskaźnik błędów rodzinnych typu I poniżej 5% dla każdego z trzech grup porównań aktywności D3 i ekspresyjnego RNA RNA.
Wyniki
Ekspresja dejodynazy w GIST
Rysunek 1
[patrz też: serwis niszczarek, adapalen, wybielanie warg sromowych ]

Powiązane tematy z artykułem: adapalen serwis niszczarek wybielanie warg sromowych